معلومات حول Chromatographie.

Chromatographie.
Technique de séparation de molécules basée sur l'aborption et l'élution
différentielles. Cette méthode de séparation implique le flux d'une
phase liquide sur une phase absorbante solide et immobile. Il existe
plusieurs types de chromatographie :
• chromatographie échangeuse d'ions : chromatographie permettant la
séparation de protéines en fonction de leurs propriétés ioniques
• chromatographie d'affinité : chromatographie permettant la séparation
de protéines en fonction de leurs propriétés de liaison à des ligands
• chromatographie d'exclusion moléculaire ou gel-filtration :
chromatographie permettant la séparation de protéines en fonction de
leur taille
Colonne échangeuse d'ions.
Une colonne échangeuse d'ions est composée d'un réseau de polymères sur
lequel sont fixés des groupements fonctionnels chargés (positivement
s'il s'agit d'une colonne échangeuse d'anions, négativement s'il s'agit
d'une colonne échangeuse de cations).

Si l'on prend l'exemple d'une colonne échangeuse d'anions, elle sera
capable de fixer des molécules chargées négativement (par exemple des
acides aminés se trouvant dans un milieu à pH supérieur à leur point
isoélectrique). Cela permet de séparer ces molécules de molécules qui
seraient chargées positivement, et qui donc vont passer au travers de la
colonne sans être retenues. Pour éluer les molécules restées accrochées
sur la colonne, il faut faire passer sur celle-ci un tampon de pH
inférieur, qui va abaisser le pH de la colonne ce qui entrainera une
modification de charge des acides aminés , qui vont se charger
positivement (on se retrouve à pH inférieur à leur point isoélectrique)
ce qui va permettre de les décrocher.